Nowatorskie wykrywanie kwasu nukleinowego koronawirusa

Wykrywanie kwasów nukleinowych ma cechy wczesnej diagnozy, wysoką czułość i swoistość i jest „złotym standardem” w diagnozowaniu nowego zapalenia płuc wieńcowych.Obecnie najszerzej stosowana technologia ilościowego RT-PCR fluorescencyjnego w czasie rzeczywistym.Na ogół wykrywane są dwa cele zlokalizowane na genach ORF1ab i N wirusa.Ta sama próbka musi osiągnąć wynik dodatni dla podwójnego celu lub powtórzony test jako wynik dodatni dla pojedynczego celu, lub dwie próbki muszą osiągnąć wynik dodatni w pojedynczym celu w tym samym czasie, aby potwierdzić pozytywny wynik kwasu nukleinowego wirusa SARS-CoV-2.

1. Zasada działania zestawu do wykrywania kwasów nukleinowych?Jako cel wykrywania wykorzystywana jest unikalna sekwencja genu wirusa.Poprzez amplifikację PCR wybrana przez nas docelowa sekwencja DNA wzrasta wykładniczo.Każda amplifikowana sekwencja DNA może być połączona z sondą znakowaną fluorescencyjnie, którą dodaliśmy wcześniej., Wytwarzaj sygnał fluorescencyjny, im więcej amplifikowanych genów docelowych, tym silniejszy nagromadzony sygnał fluorescencyjny.W próbkach bez wirusa, ponieważ nie ma amplifikacji genu docelowego, nie można wykryć wzrostu sygnału fluorescencji.Dlatego wykrywanie kwasu nukleinowego polega w rzeczywistości na ustaleniu, czy w próbce znajduje się wirusowy kwas nukleinowy poprzez wykrywanie akumulacji sygnałów fluorescencyjnych.

2. Jakie są rodzaje próbek do badania kwasów nukleinowych?

Ogólnie rzecz biorąc, wymazy z nosa, wymazy z gardła, wymazy z nosogardzieli, plwocina, płyn z płukania oskrzeli, płyn z płukania pęcherzyków płucnych i tak dalej.

3. Wykrywanie w pięciu krokach Nowa procedura wykrywania koronawirusa obejmuje pięć etapów: pobieranie próbek, przechowywanie próbek, przechowywanie, ekstrakcję kwasu nukleinowego i testy komputerowe.Wymaga to rygorystycznych eksperymentów naukowych, aby zakończyć.

1. Przetrzyj tylną ścianę wymazu gardłowego i obustronne migdałki gardłowe po 5-10 razy wymazówką z gardła i obracaj wymazówką;

2. Personel medyczny jest zobowiązany do przechowywania próbki, a główka wacika jest zanurzona w roztworze do konserwacji komórek, a ogon jest złamany.Natychmiast dokręć nakrętkę probówki;

3. Zapisz, umieść próbówkę w zamkniętej torbie i wyślij ją do kontroli na czas, a proces kontroli wymaga ścisłego środowiska transportowego, przechowywanego w temperaturze 2-8 stopni Celsjusza.

4. Przeprowadzić ekstrakcję kwasu nukleinowego, ekstrahować kwas nukleinowy z próbki inaktywowanego wirusa w celu późniejszego wykrycia i użyć zautomatyzowanego sprzętu, takiego jak ekstraktor kwasu nukleinowego.

5. Wykrywanie kwasu nukleinowego fluorescencyjnego PCR, to znaczy wykrywanie maszynowe, wymaga 70-80 minut, aby ekstrakt przeszedł reakcję amplifikacji fluorescencyjnej PCR.

4. Jakie są problemy z wykrywaniem kwasów nukleinowych?

Fałszywie ujemne, z powodu niewłaściwego pobierania próbek, niewłaściwego przechowywania próbek, stosowania różnych rodzajów próbek i stosowania odczynników różnych producentów mogą spowodować, że wyniki testu kwasu nukleinowego będą „fałszywie ujemne” i pominąć diagnozę;

Wysokie wymagania dotyczące sprzętu lub platform do wykrywania, instrumenty RT-PCR o wysokiej czułości są drogie i wymagają wysokiej czystości laboratoryjnej i operatorów;

Testowanie kwasów nukleinowych zajmuje dużo czasu, a wykonanie testu RT-PCR zajmuje zwykle 4-6 godzin.Jednak biorąc pod uwagę transport próbek, w przypadku dużych zaległości w próbkach wyniki można zwykle zgłosić już w ciągu 24 godzin.Dlatego też, gdy test kwasu nukleinowego jest ujemny, dodanie wykrywania przeciwciał IgM i IgG może zrekompensować wady, które test kwasu nukleinowego może spowodować pominięcie diagnozy.